Question

从蓝光到紫外线都能使绿色荧光蛋白（GFP）激发，发出绿色萤光。研究人员将某病毒的外壳蛋白（L1）基因与GFP基因连接，获得了L1-GFP融合基因，并将其插入质粒PO，构建了重组质粒P1，。下图为P1部分结构和限制酶酶切位点的示意图，相关叙述正确的是（    ）

 

A.将L1-GFP融合基因插入质粒PO时，使用了E1、E2和E4三种限制性核酸内切酶

B.可借助基因工程、核移植技术、早期胚胎培养及胚胎移植技术获得转基因的克隆牛

C.可采用抗原-抗体杂交技术检测该融合基因是否存在于转基因牛的不同组织细胞中

D.若在某转基因牛皮肤细胞中观察到绿色荧光，则说明L1基因在该细胞中完成表达

Answer

BD

【解析】

基因工程技术的基本步骤：

（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。

（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。

（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。

（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。

A、将L1-GFP融合基因插入质粒P0时，使用了El和E4两种限制性核酸内切酶，A错误；

B、可借助基因工程、核移植技术、早期胚胎培养及胚胎移植技术获得转基因的克隆牛，B正确；

C、可采用DNA分子杂交技术检测该融合基因是否存在于转基因牛的不同组织细胞中，抗原-抗体杂交技术用于检测目的基因是否成功表达，C错误；

D、若在某转基因牛皮肤细胞中观察到绿色荧光，则说明L1基因在该细胞中完成表达，D正确。

故选BD。