Question

某种细菌的培养和分离过程示意图如下。图中①~③表示实验过程，A₁、B₁、B₂和B₃代表平板，a₁、a₂、b₁、b₂和b₃代表菌落。

（说明：平板影印指用无菌绒布轻盖在已长好菌落的原培养基上，然后不转动任何角度，“复印”至新的培养基上进行接种）

回答下列问题：

（1）原始菌株的①扩大培养应选用____培养基。

（2）在A₁上获得单菌落的方法是____法。已知A₁的成分是：葡萄糖、NaCl、K₂HPO₄、尿素、水、琼脂，某同学据此得出结论：该种细菌以尿素为氮源。你是否同意该结论？____，请说明理由：____。

（3）B₁~B₃中添加了适宜浓度的青霉素，依图示结果，说明b₁~b₃具备____的特性。为研究该耐药菌产生的原因是青霉素的选择作用还是诱变作用，应选取____（A．a₁  B．a₂  C．b₁或b₂或b₃  D．任意一个菌落）涂布在A₂（成分与A₁相同）平板中继续培养，待长出菌落后影印到含相同浓度青霉素的B₄（成分与B₁~B₃相同）平板中。若A₂和B₄中菌落的生长情况相似，可证明青霉素所起的是____作用。

（4）关于上述细菌培养和分离的叙述，正确的是____

A．含青霉素的培养基无需用高压蒸汽灭菌

B．实验操作过程中必须打开超净台上的紫外灯

C．涂布分离法，单菌落更易分开，操作更简单

D．平板接种细菌后，放入恒温培养箱中倒置培养

Answer

液体 涂布分离 否 琼脂中含有氮元素，不能说明该细菌利用尿素作氮源 抗青霉素 A 选择 D

【解析】

依据题意，实验通过扩大培养原始菌种后，利用涂布分离处单菌落，再用平板影印法将单菌落转移到不同的培养基上，发现从未接触过青霉素的菌种中也产生了青霉素的抗性，证明抗性并非由青霉素诱导而来，而是在菌群中自发产生，只是被青霉素使用选择出来了。

（1）原始菌株的①扩大培养应选用液体培养基，有利于培养基成分与细菌的充分接触，迅速繁殖。

（2）在A1上获得单菌落的方法是涂布分离法。因为琼脂中也含有氮元素，因此不能说明该细菌利用尿素作氮源。

（3）依图示结果，只有b1~b3处正常生长了菌落，说明b1~b3具备抗青霉素的特性。应选取与b1~b3位置一致的a1处菌落涂布在A2平板中继续培养，待长出菌落后影印到含相同浓度青霉素的B4平板中。A2中的菌落从未接触过青霉素，但与B4中接触青霉素的菌落的生长情况相似，可证明菌群在没有接触青霉素的情况下也具有相同的青霉素抗性，因此青霉素所起的是选择而不是诱导作用。

（4）A、含青霉素的培养基需用高压蒸汽彻底灭菌，A错误；

B、实验操作之前必须打开超净台上的紫外灯对接种环境进行灭菌，B错误；

C．涂布分离法，单菌落更易均匀分开，但操作不如划线分离法简单，C错误；

D．平板接种细菌后，放入恒温培养箱中倒置培养，可防止培养基中的水蒸气蒸发，也避免培养皿盖的水滴落下造成污染，D正确。

故选D。