Question

酵母菌在工业生产中具有重要的用途，常用YPD进行培养。YPD又叫酵母浸出粉胨葡萄糖培养基，其配方为1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖。酵母膏是指采用新鲜酵母为原料，经酶解自溶、分离过滤、浓缩而得到的一种棕黄色至棕褐色的膏状物。请回答：

（1）YPD中为酵母菌提供氮源的是___________，制备好的YPD常用___________法进行灭菌，平板冷凝后，要将平板___________。

（2）该培养基加入琼脂后可以制成固体培养基，若要以该固体培养基培养酵母菌并对菌落进行计数，接种时，应采用的方法是___________。通过统计平板上的菌落数，就能推测样品中大约含有的活菌数，原因是____________。

（3）在对酵母菌的扩大培养过程中，将发酵液稀释10⁷倍后，每个平板使用0．1毫升进行接种，理论上每个平板上的菌落个数为___________，可认为发酵液达到每毫升6×10⁹个活细胞的预期密度。

（4）酵母菌用于酿酒时，发酵初期通入无菌空气，后期密闭，密闭培养过程中，由于发酵液________，因此其他微生物很难生存。酿制过程中，密闭不严会使酒变酸，原因是____________。

Answer

酵母膏、蛋白胨 高压蒸汽 倒置 稀释涂布平板法 样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌 60 缺氧、呈酸性 醋酸菌大量繁殖并使乙醇变为乙酸

【解析】

微生物常见的接种的方法有稀释涂布平板法和平板划线法。

平板划线法：将已经熔化的培养基倒入培养皿制成平板，接种，划线，在恒温箱里培养。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成单个菌落。

稀释涂布平板法：将待分离的菌液经过大量稀释后，均匀涂布在培养皿表面，经培养后可形成单个菌落。

（1）YPD的配方为1%酵母膏、2%蛋白胨、2%葡萄糖，其中为酵母菌提供氮源的是酵母膏、蛋白胨；培养基常用高压蒸汽法进行灭菌；平板冷凝后，要将平板倒置。

（2）接种微生物常用稀释涂布平板法和平板化学法，其中只有稀释涂布平板法能对微生物进行计数，故应采用稀释涂布平板法；统计平板上的菌落数，就能推测样品中大约含有的活菌数，原因是当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。

（3）在对酵母菌的扩大培养过程中，将发酵液稀释107倍后，每个平板使用0.1毫升进行接种，理论上每个平板上的菌落个数为N时，可认为发酵液达到每毫升6×109个活细胞的预期密度，则N×107÷0.1=6×109，解得N为60。

（4）果酒发酵过程中，由于发酵液缺氧、呈酸性，因此其他微生物很难生存。酿制过程中，密闭不严会使酒变酸，原因是醋酸菌大量繁殖并使乙醇变为乙酸。