Question

巴氏芽孢杆菌广泛分布在土壤、堆肥以及污水中，是一类具有较高脲酶活性的尿素分解细菌，下图为某兴趣小组从土壤中分离巴氏芽孢杆菌的操作流程。回答下列问题：

（1）配制培养基时，按照培养基配方准确称量各组分，将其溶解、定容后，调节培养基的pH，然后对培养基进行分装，并进行____________

（2）步骤③、④分离巴氏芽孢杆菌的方法是____________

（3）甲同学在没有设置对照的情况下，从一定稀释倍数的培养基中筛选出大约150个菌落。但是，其他同学在同样的稀释度下只筛选出大约50个菌落。经过大家的讨论和初步实验探究，认为造成上述结果的原因不是因为培养基被杂菌污染了而是由于培养基中混入了其它含氮物质、请设计实验验证这一结论______

Answer

高压蒸汽 稀释涂布平板法 一个菌落可能是两个或多个微生物细胞的后代形成的，所以统计的结果往往较实际值偏低 实验思路：选用甲同学的培养液、其他同学的培养液、其他同学的培养液添加少量尿素以外的其它含氮物质三种培养液等量且适量，分别培养上述土壤微生物，一段时间后，稀释相同的倍数，接种到相同的三个培养基上，等菌落数稳定后统计各个培养基中的菌落数预期结果：来自甲同学的培养液和其他同学的培养液添加少量尿素以外的其它含氮物质的两种培养液菌落数较多，而来自其他同学的培养液菌落数较少

【解析】

从土壤中分离微生物的一般步骤是：土壤取样、选择培养、梯度稀释、涂布培养和筛选菌株。筛选目的微生物应该使用选择培养基，配制培养基的一般操作是配制培养液、调整pH、分装、包扎、灭菌、搁置斜面。微生物的计数常用稀释涂布平板法接种，采用固体平板培养细菌时，要将培养皿倒置。

（1）制作培养基时，操作过程为计算、称量、溶化、配制培养液、调整pH、分装、包扎、灭菌、倒平板，培养基需要进行高压蒸汽灭菌。

（2）图中步骤③、④分离巴氏芽孢杆菌的方法是稀释涂布平板法，此方法还可以对细菌进行计数，但结果往往较实际值低，原因是一个菌落可能是两个或多个微生物细胞的后代形成的，所以统计的结果往往较实际值偏低。

（3）根据题干信息，结合实验设计原则，实验思路和预期结果如下：实验思路：选用甲同学的培养液、其他同学的培养液、其他同学的培养液添加少量尿素以外的其它含氮物质三种培养液等量且适量，分别培养上述土壤微生物，一段时间后，稀释相同的倍数，接种到相同的三个培养基上，等菌落数稳定后统计各个培养基中的菌落数。预期结果：来自甲同学的培养液和其他同学的培养液添加少量尿素以外的其它含氮物质的两种培养液菌落数较多，而来自其他同学的培养液菌落数较少。