Question

有机磷农药曾因残留时间短、易挥发、易因温度升高而降解等特点而广泛使用，但长期大量的使用会对环境造成很大的危害。科研工作者分离具有降解有机磷农药的微生物并对其降解效果进行研究。

一、实验材料

①土样：采集常年使用有机磷农药的麦田地、油菜地、菜园地、苎麻地的土壤。

②原料：有机磷农药敌敌畏乳油（分子式C₄H₇C₂O₄P）。

③培养基的主要成分：NaCl5．0g，NaNO₃10．0g，琼脂20．0g，水100mL，pH7．0~7．5

二、实验步骤

a．制备土壤溶液：各称5g不同土壤分别倒入带有玻璃珠的50mL无菌水中震荡制成10^-1浓度土壤溶液

b．倒平板：将经过高压蒸汽灭菌的培养基冷却到60℃时加入不同浓度的敌敌畏乳油进行倒平板操作

c．接种：分别取不同土样、不同浓度的土壤溶液接种到培养基平板上。

d．培养和统计：结果如下表：

表：各样品在不同浓度农药中的培养结果

	5P	6P	7P	8P	9P	10P	11P
麦田	90	5	0	0	0	0	0
菜园	98	23	8	6	2	0	0
油菜地	108	97	88	75	67	4	0
苎麻地	104	73	43	2	0	0	0

注：表中记录的是菌落数；P=g农药/1000mL培养基。

请回答下列问题：

（1）步骤a容器中玻璃珠的作用是________________。

（2）步骤b中制得的培养基从功能上说是一种_________________培养基，敌敌畏乳油可为微生物提供_______________。

（3）加入敌敌畏乳油是在培养基冷却到6℃而不是在高压蒸汽灭菌前的原因是___________。

（4）下图甲为某组实验的结果，推测该组接种时可能的操作失误是___________________；对该菌种进一步纯化，在制作乙平板的过程中，接种环共需灼烧___________次。

（5）根据上表的统计结果，四种不同的取样环境中，应选用______________样品中的微生物作为进一步筛选高效分解有机磷农药的菌株。

Answer

促进土壤溶液混合均匀 选择 碳源（碳源和无机盐） 避免因高温导致有机磷农药分解而对实验结果的准确性造成影响 涂布不均匀 4 油菜地

【解析】

选择培养基是指一类根据特定微生物的特殊营养要求或其对某理化因素抗性的原理而设计的培养基。具有只允许特定的微生物生长，而同时抑制或阻止其他微生物生长的功能。
1．培养基一般含有水、碳源、氮源、无机盐等。
2．常用的接种方法：平板划线法和稀释涂布平板法。
3．常用的灭菌方法：干热灭菌法、灼烧灭菌法、高压蒸汽灭菌法。

（1）步骤a容器中玻璃珠的作用是促进土壤溶液混合均匀，避免了玻璃棒的使用。

（2）步骤b中制得的培养基从功能上说是一种选择培养基，因为在该培养基中能够分解敌敌畏的微生物能够被选择下来。敌敌畏乳油能为微生物提供碳源。

（3）为避免因高温导致有机磷农药分解而对实验结果的准确性造成影响，需要在培养基冷却到60℃时加入敌敌畏乳油制得选择培养基。

（4）下图甲为某组实验的结果，由培养基中菌落的分布可推测该组接种时可能涂布不够均匀；在对该菌种进一步纯化，又制作乙平板，在乙平板中用平板划线法进行接种，共接种了3个区域，接种环共需灼烧4次，因为在接种完成后，避免对环境造成污染，还需要对接种环进行灼烧灭菌。

（5）根据上表的统计结果，可推测从油菜地获得的样品中分解敌敌畏的微生物多，故需要选择该样品中的微生物作为进一步筛选高效分解有机磷农药的菌株。