Question

用噬菌体抗体库技术获得人的单克隆抗体，方法是将人抗体基因插入噬菌体载体，然后让该噬菌体感染大肠杆菌，抗体可能和病毒蛋白以融合蛋白的形式附着在噬菌体表面，也可能通过大肠杆菌分泌出去。回答下列问题：

（1）获取人抗体基因时，可从人的___（填“B”“T” 或“体”）细胞中获取总RNA，逆转录成_________再通过__________扩增出抗体基因。在PCR反应体系中，加入dNTP （dCTP、dATP、dGTP和dTTP）的作用是_______________________________。

（2）在噬菌体抗体库的构建过程中，理论上可以不利用Ca²⁺处理大肠杆菌，依据是___________________。

（3）从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是____________________。

（4）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAG）的对应序列，部分终止密码子突变型的菌株在表达时，终止密码子（UAG）会被通读为谷氨酸（GAG），那么抗体基因的表达产物是__________（填“融合蛋白”或“分泌型抗体”）。

（5）与利用杂交瘤技术生产的单克隆抗体相比，用该技术省去了___________（步骤），使制备更简单易行。

Answer

B cDNA PCR技术 提供合成DNA的原料和能量 噬菌体可以侵染大肠杆菌，可将重组DNA分子注入大肠杆菌 抗原-抗体杂交 融合蛋白 动物细胞融合

【解析】

1、基因工程技术的基本步骤：
（1）目的基因的获取：方法有从基因文库中获取、利用PCR技术扩增和人工合成。
（2）基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
（3）将目的基因导入受体细胞：根据受体细胞不同，导入的方法也不一样。将目的基因导入植物细胞的方法有农杆菌转化法、基因枪法和花粉管通道法；将目的基因导入动物细胞最有效的方法是显微注射法；将目的基因导入微生物细胞的方法是感受态细胞法。
（4）目的基因的检测与鉴定：分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术。个体水平上的鉴定：抗虫鉴定、抗病鉴定、活性鉴定等。
2、噬菌体是一种专门侵染细菌的病毒，可作为基因工程的运载工具。
3、制备单克隆抗体需要采用动物细胞融合技术、动物细胞培养技术等。

（1）抗体基因只在效应B细胞中才表达，因此要获取人抗体基因，可从人的B细胞（已经免疫的B细胞）中获取总RNA，逆转录成cDNA，再通过PCR技术扩增出抗体基因。在PCR反应体系中，加入dNTP（dCTP、dATP、dGTP和dTTP）的作用是提供合成DNA的原料和能量。
（2）噬菌体可以侵染大肠杆菌，可将重组DNA分子注入大肠杆菌，因此在噬菌体抗体库的构建过程中，可以不利用Ca2+处理大肠杆菌。
（3）从噬菌体抗体库中筛选特异性抗体的方法是抗原一抗体杂交，原理是抗原和抗体特异性结合。
（4）在抗体基因与噬菌体基因之间设计了一个终止密码子（UAG）的对应序列，在终止密码子突变型的菌株表达时，终止密码子（UAG）会被通读为谷氨酸（GAG），形成抗体和病毒蛋白的融合蛋白。
（5）杂交瘤细胞是采用动物细胞融合技术产生的，因此与利用杂交瘤技术生产的单克降抗体相比，噬菌体抗体库技术省去了动物细胞融合，使抗体制备更简单易行。