Question

回答下列（一）（二）小题：

（一）回答与利用猕猴桃进行食品发酵有关的问题：

（1）制备猕猴桃汁。将猕猴桃清洗、消毒、破碎，制成匀浆。利用猕猴桃直接制成的猕猴桃汁较为浑浊，加入__________之后，会出现絮状物，说明含有较多的果胶。为获得无色澄清的果汁，需要首先进行脱色处理，然后再加入___________，将果胶分解为半乳糖醛酸。

（2）制备猕猴桃酒。将获得的猕猴桃汁置于90℃环境中___________处理15分钟，以减少其他杂菌干扰。制作出的果汁，加入活化的酵母悬液，再加入__________发酵，可以用来制作酒精含量较高、含糖量也高的猕猴桃酒。由于维生素C与2，4-二硝基苯肼作用可形成红色产物，采用光电比色法测定猕猴桃酒中维C的含量时，应先制作以__________为横坐标、以__________为纵坐标的标准曲线。

（3）制备猕猴桃醋。将猕猴桃酒用蒸馏水进行稀释，然后接种醋杆菌进行发酵。稀释的原因是__________，果醋发酵与果酒发酵条件上的不同之处有__________。（答两点）

（二）科研人员采用一系列现代生物科学技术获得转基因克隆羊，以便通过乳腺生物反应器生产乙肝疫苗，其过程如下图所示。请据图回答相关问题：

（1）图示中，①过程所需的工具酶有__________，形成的重组DNA经②过程导入胚胎干细胞常用的方法是__________。

（2）过程④培养皿中除加入动物细胞培养液外，还需加入__________，作用是__________。

（3）重组细胞经过__________、胚胎培养和胚胎移植后得到转基因克隆羊，影响⑦过程胚胎成活率的因素有__________（试举2例）。

（4）培育乳腺生物反应器的过程中，乙肝疫苗基因的受体细胞宜选择胚胎干细胞，原因是__________；所得转基因克隆羊能否成功生产乙肝疫苗，可用___________作为特异性探针对其乳汁进行检测。

Answer

95%的乙醇 果胶酶和果胶甲酯酶 灭菌 一定量蔗糖 维生素C的含量 光密度值 防止酒精杀死醋杆菌 果醋发酵温度较高，为需氧发酵，果酒发酵温度较低，为厌氧发酵 限制性核酸内切酶、DNA连接酶 显微注射法 饲养层（胚胎成纤维细胞） 既能促进其生长，又能抑制胚胎干细胞分化 胚激活 胚胎移植时期、胚胎移植部位、胚胎移植环境温度、代孕母发情状态等 克隆成功率高 乙肝抗体

【解析】

（一）1、在利用酵母菌发酵时最好是先通入足够的无菌空气在有氧环境下一段时间使其繁殖，再隔绝氧气进行发酵；酒精发酵的最佳温度是在18℃～25℃，pH最好是弱酸性。
2、醋酸菌好氧型细菌，当缺少糖源时和有氧条件下，可将乙醇（酒精）氧化成醋酸；当氧气、糖源都充足时，醋酸菌将葡萄汁中的糖分解成醋酸；醋酸菌生长的最佳温度是在30℃～35℃。

（二）分析题图：图中①表示构建基因表达载体，②表示将目的基因导入受体细胞，③表示从早期胚胎中获取胚胎干细胞，④表示动物细胞培养过程，⑤表示核移植，⑥表示早期胚胎培养，⑦表示胚胎移植。

（一）（1）利用猕猴桃直接制成的猕猴桃汁较为浑浊，加入95%的乙醇之后，会出现絮状物，说明含有较多的果胶。果胶酶和果胶甲酯酶可以将果胶分解为半乳糖醛酸。
（2）将获得的猕猴桃汁置于90℃环境中灭菌处理15分钟，以减少其他杂菌干扰。制作出的果汁，加入活化的酵母悬液，再加入一定量蔗糖发酵，可以用来制作酒精含量较高、含糖量也高的猕猴桃酒。由于维生素C与2，4-二硝基苯肼作用可形成红色产物，采用光电比色法测定猕猴桃酒中维C的含量时，应先制作以维生素C的含量为横坐标、以光密度值为纵坐标的标准曲线。
（3）为防止酒精杀死醋杆菌，因此将猕猴桃酒用蒸馏水进行稀释。果醋发酵与果酒发酵条件上的不同之处有果醋发酵温度较高，为需氧发酵，果酒发酵温度较低，为厌氧发酵。

（二）（1）图示①为基因表达载体的构建过程，该过程首先需要用同种限制酶切割外源DNA和运载体，其次需要用DNA连接酶将目的基因与运载体连接形成重组DNA，因此该过程所需的工具酶有限制酶、DNA连接酶；②过程表示将目的基因导入受体细胞，当受体细胞是动物细胞时，最有效的导入方法是显微注射法。
（2）过程④培养皿中除加入动物细胞培养液外，还需加入饲养层（胚胎成纤维细胞），其既能促进其生长，又能抑制胚胎干细胞分化。
（3）重组细胞经过胚激活、胚胎培养和胚胎移植后得到转基因克隆羊；影响⑦胚胎移植过程胚胎成活率的因素有胚胎移植时期、胚胎移植部位、胚胎移植环境温度、代孕母发情状态等。
（4）培育乳腺生物反应器的过程中，乙肝疫苗基因的受体细胞宜选择胚胎干细胞，原因是胚胎干细胞分裂能力较强，这样克隆成功率高；所得转基因克隆羊能否成功生产乙肝疫苗，可用抗原-抗体杂交法检测，即用乙肝抗体作为特异性探针对其乳汁进行检测。