Question

【生物﹣选修1生物技术实践】

某研究小组设计了以下实验探究土壤中微生物对尿素是否有分解作用，并成功筛选到能高效降解尿素的细菌（目的菌）．实验步骤如图所示，培养基成分如表所示．请分析回答问题：

KH₂PO₄    1.4g

Na₂HPO₄    2.1g

MgSO₄•7H₂O    0.2g

葡萄糖    10.0g

尿素    1.0g

琼脂    15.0g

将上述物质溶解后，用蒸馏水定容到1000mL   

（1）培养基中加入尿素的目的是筛选 目的菌 ，这种培养基属于 选择 培养基．

（2）“目的菌”生长所需的氮源和碳源分别来自培养基中的 尿素 和 葡萄糖 ，实验需要振荡培养，原因是 为目的菌提供氧气 ．

（3）转为固体培养时，常采用 涂布平板（划线） 的方法接种，获得 单菌落 后继续筛选．

（4）下列材料或用具中：①培养细菌用的培养基与培养皿；②玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管；③实验操作者的双手．需要灭菌的是 ①② ；需要消毒的是 ③ ．（填序号）

（5）在进行分离分解尿素的细菌的实验时，A同学从培养基上筛选出大约150个菌落，而其他同学只选择出大约50个菌落．A同学的实验结果产生的原因可能有 ①②③ （填序号）．

①由于土样不同  ②由于培养基污染     ③由于操作失误  ④没有设置对照

（6）在该实验中，可以通过检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解，所依据的原理是 微生物产生的脲酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高 ．所用方法是在培养基中加入 酚红指示剂 ，若尿素被分解，则培养基变成红色．

Answer

（1）目的菌 选择

（2）尿素 葡萄糖 为目的菌提供氧气

（3）涂布平板（划线） 单菌落

（4）①②③

（5）①②③

（6）微生物产生的脲酶能将尿素分解成氨，氨会使培养基的pH升高 酚红指示剂

【解析】

试题分析：本题是对用于微生物培养的培养基的配方及营养成分、选择培养基的选择作用、常用的接种方法、无菌操作技术、对分解尿素的菌的鉴定等相关知识的综合性考查，回忆微生物培养的培养基的配方和营养成分、选择培养基的选择作、常用的接种方法的具体操作和目的，无菌操作技术、对分解尿素的菌的鉴然后结合问题进行解答．

【解析】
（1）该实验的目的是筛选到能高效降解尿素的细菌，因此培养基中加入尿素的目的是能高效降解尿素的细菌（目的菌），不能分解尿素的细菌将因缺少氮源无法生长繁殖，因此从功能上看，该培养基属于选择培养基．

（2）目的菌生长繁殖需要的氮源来自尿素，碳源来自葡萄糖；由于分解尿素的菌是需要微生物，因此需要震荡培养．

（3）固体培养基上常用的接种方法是稀释涂布法和平板划线法；通过稀释涂布法或者平板划线法逐渐稀释，当稀释度足够大时可以获得由单个细胞繁殖而来的菌落，然后进行挑选．

（4）为了保证培养物不被污染，对培养细菌用的培养基与培养皿和玻璃棒、试管、锥形瓶和吸管要进行灭菌，实验操作者的双手要进行消毒．

（5）由题意知，该同学与其他同学获得的菌落数差异很大，可能的原因是采用的土样不同，培养基灭菌不彻底，培养基被污染；或者是实验过程中没有进行无菌操作．

（6）尿素被分解尿素的菌氧化成氨气，氨气会使培养基碱性增强，PH升高，指示剂酚红变红，因此以通过在培养基中加入酚红指示剂，检测培养基pH的变化来判断尿素是否被分解．