Question

下面是某研究小组开展的“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”研究，请协助完成有关问题：

材料仪器：新鲜猪血、低速冷冻离心机、透析袋、电泳仪等。

化学试剂：pH为7.4的缓冲液、柠檬酸钠、奈氏试剂(与NH反应出现黄色或红棕色沉淀)、饱和(NH₄)₂SO₄溶液、生理盐水等。

实验步骤：

（1）样品获取：向新鲜猪血中加入__________，静置一段时间后取上层     。

（2）盐析法粗提蛋白质：

①向血浆中加入一定体积的饱和(NH₄)₂SO₄溶液，使(NH₄)₂SO₄的浓度达到50%，充分混合后静置、离心，取沉淀物。

②向沉淀物中加入适量生理盐水使之溶解，再向其中加入一定体积的饱和(NH₄)₂SO₄溶液，使(NH₄)₂SO₄的浓度达到33%，充分混合后静置、离心，取沉淀物。

③重复步骤①、②2～3次，最后用生理盐水将沉淀溶解即得粗提品。盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是__________，重复步骤①、②的主要目的是__________。

（3）透析除盐：将粗提品装入透析袋，以pH为7.4的缓冲液作透析液，每隔4 h更换一次透析液，每次更换前利用奈氏试剂检测透析液中NH的量。利用缓冲液作透析液的目的是__________。检测中，若观察到透析液__________时，即可终止透析。

（4）凝胶色谱法分离：透析后的样品经凝胶柱洗脱，获得纯净血浆某白蛋白样品。

（5）分子量测定：化学物质SDS能使蛋白质变性，解聚成单条肽链。在聚丙烯酰胺凝胶电泳中加入一定量的SDS，电泳迁移率完全取决于肽链的分子大小。下图为本实验中用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定血浆某白蛋白的结果。根据电泳结果，某同学得出“提取的血浆某白蛋白有两条肽链”的结论，这种说法可靠吗？理由是___________________________________________________________。

Answer

（1）(适量的)柠檬酸钠 血浆

（2）③该血浆白蛋白在50%和33%的(NH4)2SO4溶液中溶解度低 除去更多的杂蛋白

（3）避免因pH变化对蛋白质结构造成破坏 不出现黄色或红棕色沉淀

（5）不可靠，只能得出提取的血浆某白蛋白含有两种大小不同的肽链，不一定是两条

【解析】

试题分析：（1）为防止血液凝固，在采血容器中要预先加入抗凝剂柠檬酸钠；静置一段时间后取上层血浆。

（2）③盐析粗提“血浆某白蛋白”的主要原理是该血浆白蛋白在50%和33%的(NH4)2SO4溶液中溶解度低；重复步骤①、②的主要目的是除去更多的杂蛋白。

（3）强酸、强碱、温度过高都会使蛋白质发生变性，利用缓冲液作透析液的目的是避免因pH变化对蛋白质结构造成破坏；检测中，若观察到透析液中不出现黄色或红棕色沉淀时，即可终止透析。

（5）电泳的原理是利用待分离样品中各种分子带电性质的差异以及分子的大小、形状等的不同，使带电分子产生不同的迁移速度，本实验只能判断肽链的大小有两种，而不能判断其条数。

考点：本题考查“猪血浆某白蛋白的提取及分子量测定”实验的相关知识，意在考查考生具备验证简单生物学事实的能力，并对实验现象和结果进行解释、分析和处理的能力。