Question

（8分）苦马豆素(SW)最早是从植物灰苦马豆中分离获得，为了研究SW是否具有抑制肿瘤细胞生长的作用，许多学者做了大量研究，实验过程及实验结果如下：

①取小鼠肝癌Hepal-6细胞。

②制成单细胞悬液，等量接种于多孔板，加入等量培养液，每组设5个平行孔。

③于37℃、5％CO₂培养箱中培养24 h。

④加入等量不同浓度的SW溶液，于37℃、5％CO₂培养箱中培养。

⑤分别在24 h、48 h、72 h时吸取培养液，观察记录结果，得到不同浓度的SW对细胞存活率的影响曲线如图所示。

⑥将培养48h的培养液离心，细胞染色，在荧光显微镜下观察拍照，记录正常细胞和凋亡细胞的数目，并采用免疫荧光细胞技术检测细胞凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达量状况，汇总统计结果如下表。

培养48h后细胞数目及凋亡蛋白Bax和Bcl-2的表达状况

SW（μg/ml）	癌细胞数目	凋亡细胞数目	Bax蛋白	Bcl-2蛋白
2	+	++++	++++	+
1	++	+++	+++	++
0.5	+++	++	++	+++
0	++++	+	+	++++

注：“+”的数量表示相对值的大小

回答下列问题：

（1）实验中首先将小鼠肝癌Hepal-6细胞制成单细胞悬液，于37℃、5％CO₂培养箱中培养的目的是                  。培养箱中要有适量的无菌空气，原因是               。肝癌细胞悬液中细胞有悬浮生长的特征，可能的原因是                          。

（2）实验中利用多孔板培养时，每组设置5个平行孔同时进行培养，计数后统计平均值是为了                        。

（3）分析图中曲线可知，SW对肝癌Hepal-6细胞的作用效果是：①                    

             ；②                                                        。

（4）表中结果说明SW可以诱发细胞           ，从而抑制肿瘤细胞生长，从分子水平上分析，SW可能是导致癌细胞内               的合成量增加。

Answer

（1）细胞克隆（细胞分裂、细胞增殖） 细胞需进行有氧呼吸 癌细胞表面糖蛋白减少，细胞黏着性小

（2）减小偶然性误差（并使实验结果更可信）

（3）①SW浓度越高，对细胞生长（存活）的抑制作用越强

②SW作用时间越长，对细胞生长（存活）的抑制作用越强

（4）凋亡 Bax蛋白

【解析】

试题分析：

（1）动物细胞培养时，把组织分散成单个细胞，可以防止接触抑制，给予适宜的环境，目的是让细胞增殖；培养箱中要有适量的无菌空气，是因为细胞的生长需要进行有氧呼吸；癌细胞的特点之一是糖蛋白减少，细胞黏着性降低，因此培养过程中细胞会悬浮生长。

（2）实验中利用多孔板培养时，每组设置5个平行孔同时进行培养，计数后统计平均值是为了减小偶然误差并使实验结果更可信。

（3）分析坐标曲线可知，在相同作用时间，不同SW浓度对小鼠肝癌Hepal-6细胞有抑制，且随着SW浓度增加，抑制作用增强；同一SW浓度，不同作用时间对对小鼠肝癌Hepal-6细胞有抑制，且随着SW作用时间增加，抑制作用增强。

（4）分析表格信息可知：SW浓度越高，对细胞生长（存活）的抑制作用越强，细胞凋亡数量越多，Bax蛋白越多，因此可以推测可能是由于SW导致癌细胞内Bax蛋白合成量增多。

考点：本题考查动物细胞培养、细胞癌变的有关知识，意在考查考生识图能力和能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理的判断或得出正确的结论的能力；能从课外材料中获取相关的生物学信息，并能运用这些信息，结合所学知识解决相关的生物学问题。