Question

某工厂为了生产耐高温植酸酶饲料添加剂，开展了产该酶菌株的筛选、酶的固定化及其特性分析研究，其流程如下图所示。请回答：

（1）上壤悬液泞先经80℃处理15分钟，其目的是筛选出      

（2）在无菌条件下，将经过处理的土壤悬液进行     ，然后涂布于含有植酸钠的固体培养基上。培养后观察到      ，其周围出现透明水解圈，圈的直径大小与    强弱相关。

（3）筛选获得的菌株经鉴定后，将优良菌株进行液体扩大培养。培养时需要振荡，其主要目的是     。液体培养基与固体培养基相比不含有的成分是     。

（4）在合适条件下，将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成凝胶固体小球。该过程是对酶进行      。

A．吸附   B．包埋   C．装柱   D．洗涤

（5）温度与植酸酶相对酶活性的关系如图所示。下列叙述错误的是     。

A．测试温度中，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为60℃和45℃

B．测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动低于非固定化植酸酶

C．固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在80%以上时的温度范围较宽

D．65℃时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性因蛋白质变性而位于最低点

Answer

（1）耐高温菌株

（2）稀释 单菌落 植酸酶的活性

（3）供氧 琼脂

（4）B

（5） D

【解析】

（1）土壤悬液首先经80℃处理15分钟的目的是使大多数的不耐高温的微生物死亡而筛选出耐高温菌株。

（2）土壤悬液悬液在无菌条件下进行梯度稀释，使用稀释涂布平板法接种涂布于含有植酸钠的固体培养基上，经培养后可以观察到单菌落的出现，且出现透明圈，透明圈的直径大小与植酸酶的活性强弱相关。

（3）振荡培养的目的是向培养液供氧，同时使微生物与培养液充分接触，有利于微生物的繁殖与生长。液体培养基与固体培养基在物理性质上的主要区别是液体培养基不含凝固剂琼脂。

（4）固定化酶和固定化细胞的方法主要有包埋法、物理吸附法和化学结合法。题干所述方法是将提纯的植酸酶与海藻酸钠混合后，滴加到一定浓度的钙离子溶液中，使液滴形成凝胶固体小球，该过程属于包埋法。 故选B。

（5）据图分析，固定化与非固定化植酸酶的最适温度分别为60℃和45℃，A正确；图中，在测试温度范围内，固定化植酸酶的相对酶活性波动较小，低于非固定化植酸酶的波动，B正确；据图分析，固定化与非固定化植酸酶相比，相对酶活性在80%以上时的温度范围较宽，C正确；根据题意，植酸酶属于耐高温酶，65℃时固定化与非固定化植酸酶的相对酶活性不是因蛋白质变性而位于最低点，D错误。

【考点定位】微生物的分离和培养

【名师点睛】微生物的筛选与分离需要使用选择培养基。常用的接种方法主要有平板划线法和稀释涂布平板法。固定化酶和固定化细胞的方法主要有包埋法、物理吸附法和化学结合法。影响酶的活性的因素主要有温度和pH等。