Question

普通烟草转入抗盐基因培育抗盐烟草的过程如下图所示。已知含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，质粒上另有抗四环素基因和抗氨苄青霉素基因。请回答问题：

 

（1）构建重组质粒时，应选用的限制酶是____________，然后对质粒和________进行切割，以保证它们定向连接。

（2）质粒的基本单位是                   。

（3）切割后的目的基因与质粒由_______酶连接成重组质粒。筛选导入重组质粒的细菌，应在培养基中加入______________________________，

理由是___________________________________________________________________。

（4）若质粒被某一限制酶识别的序列是一GAATTC一，并在G与A之间切割。请画出被切割后所形成的黏性末端

Answer

（1）salⅠ、 HindⅢ酶 含抗盐基因的DNA

（2） 脱氧核苷酸

（3）DNA连接 氨苄青霉素 因为重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，在添加青霉素的培养基中可以存活

（4）

一G↓GATCC一 一G GATCC一

→ +

一CCTAG↓G一 一CCTAG G一

【解析】

（1）分析题图可知，构建重组质粒时，应选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割，这样会形成不同的黏性末端，可以防止目的基因、质粒的自身连接，以保证目的基因和质粒的定向连接．限制酶切断的是DNA分子中特定部位的两个脱氧核苷酸的脱氧核糖和磷酸之间的磷酸二酯键．

（2）质粒的基本单位是脱氧核苷酸。

（3）DNA连接酶可将切割后的目的基因与质粒连接成重组质粒．根据图中信息可知重组质粒带有抗氨苄青霉素基因，但四环素基因已被限制酶破坏，所以在筛选导入重组质粒的细菌时，可在不同培养基中分别加入氨苄青霉素、四环素，在添加氨苄青霉素的培养基中能成活，但在添加四环素的培养基中不能成活的即为导入重组质粒的细菌．

（4）见答案。

【考点定位】基因工程的应用

【名师点睛】分析题图：含抗盐基因的DNA和质粒上均有salⅠ、HindⅢ、BamHⅠ酶切位点，但BamHⅠ酶切位点位于目的基因上，用该酶切割会破坏目的基因，因此选用salⅠ酶和HindⅢ酶对含抗盐基因的外源DNA和质粒进行切割；质粒含有抗氨苄青霉素基因和抗四环素基因，但重组质粒只含氨苄青霉素抗性基因．