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探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数。 实验原理:农田的表层土壤中,自生固氮菌的...

探究如何从土壤中分离自生固氮菌并计数。

实验原理农田的表层土壤中自生固氮菌的含量比较多。将用表层土制成的稀泥浆,接种到无氮培养基上进行培养。在这种情况下只有自生固氮菌才能生长繁殖。

材料用具农田的表层土壤、无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、盛9 mL无菌水的大试管若干、无菌移液管、无菌涂布器、无菌培养皿、盛90 mL无菌水的锥形瓶、酒精灯、恒温满分5 manfen5.com箱。

方法步骤

1倒平板。分别将无氮培养基、牛肉膏蛋白胨培养基倒平板应在_________________________操作。

2制备土壤稀释液。取土样10 g加入盛有90 mL无菌水的锥形瓶中充分摇匀。用无菌移液管吸取上清液 1 mL转至9 mL无菌水的大试管中依次稀释到107倍稀释度。为实现无菌操作试管口和移液管应在离火焰     cm处。

3涂布。按照由107103稀释度的顺序分别吸取0.1 mL进行平板涂布每个稀释度下无氮培养基应至少涂布3个平板牛肉膏蛋白胨培养基涂布   个平板。

4培养。放入恒温箱内在适宜温度条件下培养34d。一般每隔24h统计一次选取菌落数目稳定时的记录作为结果这样可以防止                       

5细菌的计数。选取菌落数在30300的平板进行计数。如果满分5 manfen5.com测试的平均值为50则每克样品中的菌株数是     稀释度是105

6预期结果。相同稀释度下牛肉膏蛋白胨培养基上的菌落数     填“多于”或“少于”无氮培养基上的数目。理由是_____________________________________________________________2分

 

(1)酒精灯火焰旁 (2)1~2 (3)1 (4)因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 (5)5×107 (6)多于 无氮培养基上可以生存和繁殖的只是土壤中的自生固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类的生存 【解析】 试题分析: (1)倒平板应在酒精灯火焰旁进行,防止杂菌污染. (2)为实现无菌操作,试管口和移液管应在离火焰1~2cm处。 (3)按照由101~108倍稀释度的顺序分别吸取0.1mL进行平板涂布,每个稀释度下,无氮培养基应至少涂布3个平板,牛肉膏蛋白胨培养基涂布1个平板做对照. (4)一般每隔24h统计一次,选取菌落数目稳定时的记录作为结果,这样可以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目 (5)当菌落数目稳定时,选取茵落数在30-300的平板进行计数.如果测试的平均值为50,则每克样品中的菌落数是(稀释度是105倍)5×107。 (6)牛肉膏蛋白胨平板上的菌落数多于无氮培养基上的数目,原因是无氮培养基上能生存繁殖的仅是土壤中的固氮菌,而牛肉膏蛋白胨培养基上几乎允许土壤中所有菌类生存. 考点:微生物的实验室分离是高考的热点,考生需注意掌握教材上的基础知识,把握知识间的内在联系.  
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