Question

在菲律宾首都马尼拉郊外的一片稻田里，一种被称为“金色大米”的转基因水稻已经悄然收获。这种转基因大米可以帮助人们补充每天必需的维生素A。由于含有可以生成维生素A的β胡萝卜素，它呈现金黄色泽，故称“金色大米”。“金色大米”的培育流程如图所示，请回答下列问题。（已知酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—，酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—）。

（1）培育“金色大米”的基因工程操作四步曲中，其核心是__________，通过该操作形成了图中的__________（填字母），它的构成至少包括__________等。

（2）在研究过程中获取了目的基因后采用__________技术进行扩增。在构建c的过程中目的基因用__________（填“限制酶Ⅰ”或“限制酶Ⅱ”）进行了切割。检验重组载体导入能否成功，需要利用___________作为标记基因。

（3）过程d采用__________法，过程e运用了__________技术，在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行__________和_________。

Answer

(1)基因表达载体的构建 c 目的基因、启动子、终止子、标记基因（2分）

(2)PCR 限制酶Ⅱ 基因I

(3)农杆菌转化 植物组织培养 脱分化 再分化

【解析】（1）基因工程操作四步曲中的核心步骤是基因表达载体的构建，构成的c为基因表达载体（或重组质粒，重组DNA分子），它的构成除了复制原点、目的基因外，还必须有启动子、终止子、标记基因等。

（2）在研究过程中获取了目的基因后采用PCR技术进行扩增．据图分析，目的基因的两侧有-GGATCC-、-GATC-两种序列，由于酶I的识别序列和切点是一G↓GATCC一酶II的识别序列和切点是一↓GATC-，因此只能选择限制酶Ⅱ获取目的基因．图中可以看出目的基因插入到基因Ⅱ中，因此检验重组载体导入能否成功，需要利用基因I作为标记基因。

（3）由于水稻属于单子叶植物，常采用农杆菌转化；过程e将水稻细胞培养成完整植株运用了细胞工程中的植物组织培养技术，该技术的理论依据是植物细胞的全能性；在该技术应用的过程中，关键步骤是利用含有一定营养和激素的培养基诱导植物细胞进行脱分化形成愈伤组织，然后再分化形成植株。

【考点定位】查基因工程

【名师点睛】分析图【解析】
图中a表示转录过程，b表示利用mRNA进行逆转录合成目的基因，c表示基因表达载体的构建，d表示目的基因导入受体细胞，e是水稻细胞进行植物的组织培养并筛选出符合要求的植株；

目的基因的两侧分别有-GGATCC-、-GATC-两种序列，根据两种酶的酶切位点，限制酶Ⅰ只能切割左侧的序列，而限制酶Ⅱ可以切割两侧的序列。