Question

卡那霉素和头孢霉素都有抗菌作用，此外，卡那霉素还对葡萄细胞有抑制作用。研究人员将Barnase基因（雄性不育基因）转入葡萄细胞，利用卡那霉素和头孢霉素，通过植物克隆方法成功培育出大粒、无核的葡萄新品种。请回答：

（1）构建含Barnase基因、β―葡糖苷酸酶基因和卡那霉素抗性基因的重组质粒，导入农杆菌，在固体培养基中培养形成_______以便鉴定是否混有杂菌，再用_______将农杆菌转移至LB____ 培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是_________、___________。

（2）将经过_______ 的幼嫩葡萄叶片切成小块，浸入农杆菌悬浮液中，4分钟后取出（此时已有较多农杆菌附着在叶片小块上）并接种到固体培养基中。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现________和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是_____

A．抑制葡萄细胞脱分化

B．促进葡萄细胞再分化

C．杀灭农杆菌

D．促进农杆菌生长

（3）将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后，转移至生芽培养基中，待其长出______ 后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着______作用，植物克隆的技术基础_______。

（4）在卡那霉素培养基中，由于转化细胞对周围的非转化细胞有保护作用，获得的试管苗中可能存在假的转基因试管苗，因此还需对试管苗的_____基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。

（5）最后，对转基因试管苗还需进行逐渐___________湿度的锻炼，使之适应自然环境。

Answer

（14分）

（1）单菌落 接种环 液体 限制性核酸内切酶 DNA连接酶

（2）消毒 愈伤 C（2分）

（3）丛壮苗 筛选 植物组织培养

（4）β—葡糖甘酸酶

（5）降低

【解析】（1）在固体培养基中培养形成单菌落可以用于鉴定是否混有杂菌。用接种环将农杆菌转移至LB液体培养基中进行扩大培养。构建重组质粒需要用到的工具酶是限制性核酸内切酶、DNA连接酶。

（2）为了防止杂菌污染，幼嫩葡萄叶片切成小块需要消毒。培养至第3天时，可以看到在叶片小块周围出现愈伤和大量菌落。这时再用头孢霉素处理叶片小块，其目的是杀灭农杆菌。

（3）将叶片小块放入卡那霉素培养基中培养一段时间后，转移至生芽培养基中，待其长出丛壮苗后，再转移至生根培养基中继续培养形成试管苗。卡那霉素培养基起着筛选作用，植物克隆的技术基础植物组织培养。

（4）根据题干信息分析，需对试管苗的β—葡糖甘酸酶基因的表达产物进行生化检测，才能鉴别出真正的转基因试管苗。

（5）对转基因试管苗还需进行逐渐降低湿度的锻炼，使之适应自然环境。

【考点定位】植物组织培养