Question

肉皮素（ET）是一种多肽，主要通过与靶细胞膜上的ET受体（ET_A）结合而发挥生物学效应。科研人员通过构建表达载体，实现ET_A基因在大肠杆菌细胞中的高效表达，其过程如下图所示，图中SNAP基因是一种荧光蛋白基因，限制酶ApaI的识别序列为，限制酶XhoI的识别序列为。请据图分析回答：

（1）进行过程①时，需要加入缓冲液、引物、dNTP和        酶等。完成过程①②③的目的是 __________。

（2）过程③和⑤中，限制酶XhoI切割DNA,使            键断开，形成的黏性末端是_________。

（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是              的部位，进而可驱动基因的转录。除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是             。

（4）过程⑥要CaCl₂预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的             细胞。

（5）将SNAP基因表达的产物是一种荧光蛋白，将与ET_A基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测                 。

Answer

（除注明外，每空2分，共15分）

（1）反转录（逆转录）（1分） 获取目的基因（ETA基因） （2）磷酸二酯

（3）RNA聚合物的识别和结合 终止子

（4）感受态 （5）ETA基因能否表达及表达量

【解析】（1）过程①是以mRNA为模板合成cDNA，因此需要加入缓冲液、引物、dNTP和反转录（逆转录）酶等。完成过程①②③的目的是获取目的基因（ETA基因）。

（2）过程③和⑤中，用限制酶XhoI切割DNA，其目的是获取目的基因和切割质粒，在此过程中，磷酸二酯键断开，形成的黏性末端是。

（3）构建的重组表达载体，目的基因上游的启动子是RNA聚合物的识别和结合的部位，进而可驱动基因的转录。除图中已标出的结构外，基因表达载体还应具有的结构是终止子。

（4）过程⑥要CaCl2预先处理大肠杆菌，使其成为容易吸收外界DNA的感受态细胞。

（5）SNAP基因的表达产物是一种荧光蛋白，因此将SNAP基因与ETA基因结合构成融合基因，其目的是有利于检测ETA基因能否表达及表达量。

【考点定位】基因工程

【名师点睛】本题以图文结合的形式，综合考查学生对基因工程及其应用的知识的识记和理解能力。解答本题需熟记并理解相关的基础知识、形成清晰的知识网络，并且在平时的复习中要注意图文结合。