Question

我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪在东北农业大学的种猪场自然分娩产出，这标志着我国在转基因克隆猪技术领域已达到世界领先水平。下图为我国首例绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程示意图，请据图回答：

（1）一个完整的基因表达载体除了带有绿色荧光蛋白基因以外，还必须含有复制原点、启动子、终止子和________________。启动子是一段有特殊结构的DNA片段，它是___________酶识别和结合的部位；而起始密码子的化学本质则是________（DNA或RNA）。

（2）过程③将重组质粒导入猪胎儿成纤维细胞后，要通过DNA分子杂交技术，来检测绿色荧光蛋白基因是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的__________________上。

（3）从猪中取胎儿成纤维细胞，用__________________处理，然后进行分散培养。培养时，将培养瓶置于含一定量CO₂的培养箱中进行培养，CO₂的作用是_____________。

（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将__________________一并吸出。

（5）本实验所用到的现代生物科学技术有____________________________（填序号）。

A.动物细胞培养                       B.胚胎移植

C.胚胎细胞核移植                     D.DNA重组技术

Answer

标记基因 RNA聚合 RNA 染色体DNA 胰蛋白酶（或胶原蛋白酶） 维持培养液的pH 第一极体 ABD

【解析】试题分析：据图分析，①表示获取绿色荧光蛋白基因，②表示基因表达载体的构建，③表示将目的基因导入受体细胞，④表示去除卵母细胞的细胞核，⑤表示核移植，⑥表示早期胚胎的培养，⑦表示胚胎移植，⑧表示妊娠分娩获得绿色荧光蛋白转基因克隆猪。

（1）基因表达载体含有绿色荧光蛋白基因（目的基因），启动子、终止子和标记基因，其中启动子是RNA聚合识别和结合的部位，启动转录；由于终止密码在mRNA上，所以其本质是RNA。

（2）目的基因（reAnti基因）是否已重组到猪胎儿成纤维细胞的染色体上，可用DNA分子杂交技术进行检测。

（3）动物细胞培养时，需要用胰蛋白酶或胶原蛋白酶处理动物组织，使动物细胞分散成单个细胞．动物细胞培养时要放入到95%的空气（保证细胞代谢）和5%CO2（调节培养液的PH）培养箱中。

（4）过程④表示通过显微操作法吸出卵母细胞中的细胞核，微型吸管除了将细胞核吸除外，往往还要将极体一并吸出。

（5）绿色荧光蛋白转基因克隆猪的培育过程涉及到的现代生物技术有动物细胞培养、胚胎移植、胚胎细胞核移植等。

【点睛】本题通过转基因猪的获得过程来考查基因工程、动物细胞培养、细胞核移植、早期胚胎培养和胚胎移植等技术，要求考生具有一定的识图能力和理解能力，考生要识记基因工程的操作工具；明确目的基因能够与质粒发生重组的原因；识记卵细胞的特点等。