Question

【生物-选修1：生物技术实践】

下图表示分离、纯化及保存枯草芽孢杆菌菌株的简要过程，回答下列问题：

（1）将土壤表层泥土稀释液煮沸15min后获得的样品中，仍然含有一些活的菌种，原因是_____________。

（2）图中将菌种接种到平板1的方法是_______；将菌种接种到平板2之前，接种工具常用_______法进行灭菌。为了逐步分离、纯化得到目的菌种，平板1和平板2中的培养类型都应该属于______培养基。对于使用频繁的菌种可接种到上图试管中的______培养基上临时保藏。

（3）用稀释涂布平板法在5个平板上都接种稀释倍数为10⁴的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为182、160、168、175和190，据此推测，每mL样品液中的细菌数量为__________个。稀释涂布平板法能够通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数目，原因是_____________。

Answer

煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子 稀释涂布平板法 灼烧灭菌（灼烧） 选择 固体斜面 1.75x107 当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌

【解析】【试题分析】

1.因为芽孢对不良环境有较强的抗性。所以枯草在煮沸过程中，不含芽孢的细菌被杀死，而含有芽孢的枯草杆菌能够生存下来，在适宜的条件下进行繁殖生长。

2. 微生物的接种方法很多，最常用的接种方法为平板划线法和稀释涂布平板法。在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基称为选择培养基。固体选择培养基有利于菌种的分离纯化。将菌种接种到试管的固体斜面培养基上是常用的临时保藏菌种的方法。

3. 用稀释涂布平板法纯化细菌后可进行计数。每mL样品中的菌株数＝(C÷V)×M，其中代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积（mL），M代表稀释倍数。

（1）煮沸消毒法不能杀死细菌的全部芽孢和孢子，因此将土壤表层泥土稀释液煮沸15min后获得的样品中，仍然会含有一些活的菌种。

（2）据图可知，将菌种接种到平板1的方法是稀释涂布平板法；将菌种接种到平板2的方法是平板划线法，在接种之前，接种工具常用灼烧灭菌（灼烧）法进行灭菌；为了逐步分离、纯化得到目的菌种，平板1和平板2中的培养类型都应该属于选择培养基；对于使用频繁的菌种可接种到上图试管中的固体斜面培养基上临时保藏。

（3）根据公式可知，每mL样品中的菌株数＝(C÷V) ×M，其中C＝(182＋160＋168＋175＋190) ÷5＝175，V＝0.1mL，M＝104，带入公式可得每mL样品液中的细菌数量为1.75x107个；当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，因此，稀释涂布平板法能够通过统计平板上的菌落数来推测样品中的活菌数目。