Question

（一）各种微生物对氧的需求是不同的,研究组开展了氧对微生物的影响实验，请回答下列问题：

(1)将含有LB固体培养基（刚配好，尚未凝固）的锥形瓶放入高压蒸汽灭菌锅，若在121℃条件下灭菌，则灭菌时间一般为__________min,灭菌时间从_________开始。灭完菌后将锥形瓶取出，待温度下降到60℃(不烫手的温度)时，用_________擦拭桌面和双手，在超净工作台的________旁将锥形瓶中的LB培养基分装到一系列试管中，并做标记。

(2)当试管温度下降到40℃(培养基还是液态）时，用灭菌过的移液器吸取0.1mL的各类微生物悬液加到相

应试管中并封口，双手快速搓动试管，使菌种_________于培养基内后迅速将封口的试管放置在______条件下使培养基凝固。

(3)将上述试管放置于常温条件下培养48小时后观察实验结果，下图中表示果酒制作菌种的图是_________。

(二)下图为培育抗病转基因植物操作过程，请回答下列问题：

(1)抗病基因与载体结合常用________处理,获得的重组运载体通过__________方法导入________形原生质体中。

(2)图中①表示________,培养过程中需保持_______,防止杂菌污染，愈伤组织需适当配比的_______和生长调节剂诱导。

(3)抗病转基因植物获得的原理是_________________。

Answer

15 达到规定压力 酒精棉 酒精灯火焰 均匀分布 低温 B 相同的限制酶和DNA连接酶 显微注射 球 脱分化 无菌 营养物质 基因重组和植物细胞全能性

【解析】试题分析：无菌技术操作原则：
（1）操作前准备：
①操作环境应清洁、宽敞、定期消毒；物品布局合理；无菌操作前半小时应停止清扫工作、减少走动、避免尘土飞扬。
②工作人员应做好个人准备，戴好帽子、口罩，修剪指甲并洗手，必要时穿无菌衣、带无菌手套。
（2）操作中保持无菌
①工作人员应面向无菌区，手臂应保持在腰部或操作台台面以上，不可跨越无菌区避免面对无菌区谈笑、咳嗽、打喷嚏。
②用无菌持物镊取用物品；无菌物品一经取出，即使未用，也不可放回无菌容器内；一套无菌物品仅供一位患者使用，避免交叉感染。 ③无菌操作中，无菌物品疑有污染或已被污染，应予更换并重新灭菌。
（3）无菌物品保管：
①无菌物品必须与非无菌物品分开放置。
②无菌物品不可暴露于空气中，应存放于无菌包或无菌容器中，无菌包外须标明物品名称、灭菌日期，并按失效期先后顺序排放。
③定期检查无菌物品的灭菌日期及保存情况。无菌包在未被污染的情况下保存期一般为7天，过期或受潮应重新灭菌。

(一)（1）微生物培养基一般用高压蒸汽灭菌法，即在在121℃条件下灭菌15min，灭菌时间从灭菌锅内压力达到规定值时开始。为了防止杂菌污染，培养基灭菌后，倒试管之前，操作者的手和桌面都需要用酒精擦拭，而且倒试管的过程必须在酒精灯火焰旁边进行。

（2）本实验的目的是研究氧对微生物的影响，所以需要将微生物均匀分布于试管的培养基表面。培养基凝固需要在较低温度下进行。

（3）果酒制作菌种是酵母菌，是一种兼性厌氧性微生物，有氧呼吸时繁殖快，无氧呼吸时繁殖慢，面较多，下面较少，故选B。

(二)（1）基因工程中，常用相同的限制酶切割抗病基因与载体，然后用DNA连接酶将两者连接起来，构建为重组质粒，再通过显微注射方法导入球形原生质体中。

（2）图中①表示脱分化过程，培养过程中需保持无菌状态，以防止杂菌污染导致实验失败。愈伤组织需适当配比的营养物质和生长调节剂诱导。

（3）抗病转基因植物获得的过程中运用了转基因技术和植物组织培养技术，原理分别是基因重组和植物细胞的全能性。

【点睛】选修题主要考查的是书本上的一些基础概念，意在考查学生对基本的生物学技术操作的基本方法和原理的掌握，但是需要注意教材中一些特有的细节和专门的说法，比如说本题中灭菌的时间是从什么时间开始计算等。回答问题需要注意前后的联系，揣摩命题者的命题思路，不能凭借感觉胡乱回答。