Question

为扩大可耕地面积，增加粮食产量，黄河三角洲等盐碱地的开发利用备受关注。我国科学家应用耐盐基因培育出了耐盐水稻新品系。请分析并回答间题：

（1）若已获取耐盐基因的mRNA，可通过__________获取目的基因。

（2）获得耐盐基因后，构建重组DNA分子所用的限制性内切酶作用于图中的__________处，DNA连接酶作用于____________处。（填“a”或“b”）

（3）水稻是典型的单子叶植物，将重组DNA分子导入水稻受体细胞的常用方法有_______________。（写出一种即可）

（4）为了确定耐盐转基因水稻是否培育成功，既要用放射性同位素标记的____________作探针进行分子杂交检测导入是否成功，又要用____________方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

（5）进行基因工程操作一般要经过的四个步骤是___________→____________→____________→____________。

Answer

反转录（或逆转录） a a 基因枪法（或花粉管通道法） 耐盐基因（目的基因） 一定浓度的盐水浇灌转基因水稻（将转基因水稻移栽到盐碱地中） 目的基因的获取 基因表达载体的构建 将目的基因导入受体细胞 目的基因的检测与鉴定

【解析】

根据题意和图示分析可知：a处为磷酸二酯键，b处为氢键，限制酶的原理是作用在磷酸二酯键上，而不是氢键，在把表达载体导入受体细胞时，对于动物、植物、细菌是不一样的这里要区分清楚，最后一步在鉴定时可以用DNA分子杂交法，抗原抗体杂交法，还有特性验证试验法。最简单的就是移植到盐碱地中看是否具有抗性。

（1）若已获取耐盐基因的mRNA，可在逆转录酶的催化作用下通过反转录获取目的基因。

（2）图中a表示磷酸二酯键，是限制酶的切割位点，也是DNA连接酶的连接位点；b表示氢键。

（3）将重组DNA分子导入植物细胞的常用方法有基因枪法或花粉管通道法。

（4）要确定耐盐转基因水稻是否培育成功，从分子水平上，需要用放射性同位素标记的目的基因（耐盐基因）做探针进行分子杂交检测；从个体水平上，又要用一定浓度的盐水浇灌方法从个体水平鉴定水稻植株的耐盐性。

（5）进行基因工程操作一般要经过的四个步骤是目的基因的获取→基因表达载体的构建→将目的基因导入受体细胞→目的基因的检测与鉴定。