Question

随着煤炭、石油、天然气等传统能源的过度开发利用以及引起的环境污染，科学家们开始致力于寻找可替代的清洁新型能源。芒草为C4植物，具有光合效率高、二氧化碳排放量低以及纤维素含量丰富等特点，从而被选为最具潜力的生物质能源作物。下图为利用芒草成熟种子为外植体进行植物组织培养的流程图。

（1）为了防止微生物污染，过程①所用的种子需要无菌处理，方法有_________

A．75%酒精处理   B．5%的次氯酸钠处理   C．无菌水冲洗   D．高温煮沸消毒

（2）过程②、过程③分别称为_________、_________，由图分析可知诱导芒草形成愈伤组织最佳的激素配比浓度为_________。该过程在MA+3%蔗糖+0．7%琼脂为基本培养基、25度左右的_________条件下无菌培养，基本培养基加入蔗糖的目的是_________。

处理	激素浓度mg/L	愈伤组织诱导率%
2，4-D	6-BA
1	3	0	52．1±2．2
2	5	0	55．2±2．1
3	3	0．1	42．4±1．9
4	5	0．1	46．9±2．0
5	7	0．1	38．6±1．4
6	3	0．3	43．7±2．8

（3）多倍体植物茎秆粗壮、叶片比较大，在原流程的基础上增加_________这一步操作就可以获得多倍体芒草。

Answer

ABC 脱分化 再分化 5．0mg/L的2，4-D、不添加6-BA 避光 提供营养，调节渗透压 用秋水仙素处理愈伤组织

【解析】

1、在离体的植物器官、组织或细胞脱分化形成愈伤组织的过程中，需要的条件：①消毒灭菌；②一定浓度的植物激素；③适宜的温度；④充足的养料。2、影响植物组织培养的因素：①培养基配制；②外植体选取；③激素的运用；④消毒；⑤温度、pH、光照。3、植物组织培养中植物激素使用：物组织培养中关键性激素是生长素和细胞分裂素；同时使用生长素和细胞分裂素时，两者用量的比例影响植物细胞的发育方向；先使用细胞分裂素，后使用生长素；植物组织培养过程中分化成的幼苗需要移栽，移栽时，应先将培养瓶的封口膜打开一段时间，让试管苗在培养间生长几日；移栽时需用流水清洗根部的培养基；最后幼苗需移植到消过毒的新环境下生活一段时间，等幼苗长壮后再移栽到土壤中。

（1）为了防止微生物污染，过程①所用的种子需要无菌处理，方法有75%酒精处理、5%的次氯酸钠处理、无菌水冲洗。而高温煮沸消毒会杀死种子，使种子失去活性。故选ABC。

（2）过程②为脱分化，过程③为再分化。由图分析可知诱导芒草形成愈伤组织最佳的激素配比浓度为5.0mg/L 的2，4-D、不添加6-BA。该过程在MA+3%蔗糖+0.7%琼脂为基本培养基、25度左右的避光条件下无菌培养，基本培养基加入蔗糖的目的是提供营养，调节渗透压。

（3）在原流程的基础上增加用秋水仙素处理愈伤组织，抑制纺锤体形成，使染色体数目加倍，这样就可以获得多倍体芒草。