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（14分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图所示，请回答下列问题：
（1）选用新生营养芽为外植体的原因是 ，诱导外植体形成PLBs的过程称_______。（每空1分） （2）与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在________ ，_________，__________ 。 （3）脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基 后按比例加入。 ②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为 。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的 时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。 【答案】（1）细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs 细胞的脱分化 （2）生长起始较快，快速生长时间较长，PLBs产量较高 （3）①灭菌、冷却 ②75 ③PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大 【解析】 试题分析：（1）根据流程图可知，选用新生营养芽为外植体可获得PLBs，说明新生营养芽细胞分化程度低，容易诱导形成PLBs；诱导外植体形成PLBs的过程称脱分化。 （2）分析曲线图可知，与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在生长起始较快、快速生长时间较长、PLBs产量较高等方面。 （3）①由于ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基灭菌、冷却后按比例加入。 ②根据题意，实验50天完成，每10天取样，共取样5次；实验组和空白对照组一共有5组，每组每次均需要取样；为保证数据准确，每组在每次取样时要重复3次并取其平均数；所以如初始（第0天）数据已知，则实验过程中还需测定的样品数为5x5x3=75。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的PLBs重量和生物碱含量乘积的平均值最大时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。 考点：本题考查植物组织培养及其实验分析，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，能运用所学知识与观点，通过比较、分析与综合等方法对某些生物学问题进行解释、推理，做出合理判断或得出正确结论的能力。 【题型】综合题 （10分）回答下列有关泡菜制作的习题： （1）为了缩短制作泡菜时间，有人会在冷却后的盐水中加入少量陈泡菜液，加入陈泡菜液的目的是 。 （2）泡菜制作过程中，乳酸发酵过程即为乳酸菌进行 的过程。该过程发生在乳酸菌的 中。 （3）泡菜制作过程中影响亚硝酸盐含量的因素有 和 等。对亚硝酸盐的定量测定可以用_____法，因为亚硝酸盐与 的反应产物能与N1萘基乙二胺盐酸盐结合形成______色化合物。 （4）从开始制作到泡菜质量最佳这段时间内，泡菜液逐渐变酸，这段时间内泡菜坛中乳酸菌和其他杂菌的消长规律是 ，原因是 。
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【答案】（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶） DNA分子杂交 （2）超数排卵 获能 （3）显微注射法 性别鉴定 无性生殖 （4）羊乳中有htPA（或人组织纤溶酶原激活物） 【解析】 试题分析：（1）分析流程图可知，htPA基因与载体用同种限制酶切割后露出血糖的黏性末端，通过DNA连接酶连接，可构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用DNA分子杂交技术。 （2）对供体母羊注射促性腺激素，使其超数排卵，可获取更多的卵（母）细胞。采集的精子需要经过获能处理才具备受精能力。 （3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是显微注射法。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行性别鉴定。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，该过程的生殖方式是无性生殖。 （4）若检测到转ht-PA基因母羊的羊乳中有htPA，说明目的基因成功表达。 考点：本题考查基因工程和胚胎工程的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。 【题型】综合题 （14分）铁皮石斛是我国名贵中药，生物碱是其有效成分之一，应用组织培养技术培养铁皮石斛拟原球茎（简称PLBs，类似愈伤组织）生产生物碱的实验流程如下：
在固体培养基上，PLBs的重量、生物碱含量随增殖培养时间的变化如图所示，请回答下列问题：
（1）选用新生营养芽为外植体的原因是 ，诱导外植体形成PLBs的过程称_______。（每空1分） （2）与黑暗条件下相比，PLBs在光照条件下生长的优势体现在________ ，_________，__________ 。 （3）脱落酸（ABA）能提高生物碱含量，但会抑制PLBs的生长。若采用液体培养，推测添加适量的ABA可提高生物碱产量。同学们拟开展探究实验验证该推测，在设计实验方案是探讨了以下问题： ①ABA的浓度梯度设置和添加方式：设4个ABA处理组，1个空白对照组，3次重复。因ABA受热易分解，故一定浓度的无菌ABA母液应在各组液体培养基 后按比例加入。 ②实验进程和取样：实验50天完成，每10天取样，将样品（PLBs）称重（g/瓶）后再测定生物碱含量。如初始（第0天）数据已知，实验过程中还需测定的样品数为 。 ③依所测定数据确定适宜的ABA浓度和培养时间：当某3个样品（重复样）的 时，其对应的ABA浓度为适宜浓度，对应的培养时间是适宜培养时间。
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（8分）人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下：
（1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。 （2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过才具备受精能力。 （3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，该过程的生殖方式是__________。 （4）若检测到转ht-PA基因母羊_________，说明目的基因成功表达。
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下列关于酶的叙述,正确的是（ ） A.发烧时,食欲减退是因为唾液淀粉酶失去了活性 B.口服多酶片中的胰蛋白酶可在小肠中发挥作用 C.用果胶酶澄清果汁时,温度越高澄清速度越快 D.洗衣时,加少许白醋能增强加酶洗衣粉中酶的活性
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如图表示某研究小组在探究果胶酶的用量的实验结果。下列有关说法不正确的是（ ）
A．在AB段限制反应速率的主要因素是酶的用量 B．在BC段限制反应速率的因素是温度、pH、反应物浓度 C．在AC段增加反应物浓度，可以明显加快反应速率 D．在该实验给定条件下，果胶酶的最佳用量是B点对应的值
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在大小两个容器内加入等量的乳酸菌和葡萄糖的混合液，然后密封瓶口，过一段时间后进行定量分析，应得到的结果是（ ） A．小容器的乳酸比大容器的多 B．小容器的乳酸比大容器的少 C．大容器的葡萄糖比小容器的少 D．大容器与小容器内的乳酸的量相等
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为了防止橘子皮在压榨时滑脱，且出油率高，可采取的措施是（ ） A．加热煮沸 B．漂洗 C．抽滤 D．用石灰水浸泡
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下列有关乳酸菌代谢的叙述中，正确的是（ ） A．乳酸菌没有细胞器，只能进行无氧呼吸 B．乳酸菌的蛋白质合成在自身的核糖体上进行 C．乳酸菌的代谢终产物有乳酸和CO2 D．果胶酶可分解乳酸菌的细胞壁中的果胶
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下图为苹果酒的发酵装置示意图,下列叙述正确的是（ ）
A.发酵过程中酒精的产生速率越来越快 B.集气管中的气体是酵母菌无氧呼吸产生的 CO2 C.发酵过程中酵母种群呈“J”型增长 D.若发酵液表面出现菌膜,最可能原因是发酵瓶漏气
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果汁生产中果胶酶能提高果汁出汁率和澄清度。为了节约成本，某工程人员在适宜的温度和pH下，利用苹果汁和一定浓度的果胶酶溶液探究果胶酶的最适用量，实验结果如图。对实验失误可能的原因分析及改进方法都合理的是（ ）
A．酶促反应时间不合理；延长反应时间 B．苹果汁的用量不合理；减少用量 C．果胶酶用量不合理；减少用量 D．果胶酶体积梯度不合理；增大体积梯度
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